Reprise du message précédent :

Tu bosses sur quoi?

modélisation chromatographique de l'interaction entre membranes biologiques et une molécule à interet thérapeutique l'huperzine_A (c'est un inhibiteur de l'acetylcholine estérase)

Il manque le schema    
 
 
 
Ou ca ? Prive/public ?    
 
Tu fais une these ?    
 

hors sujet mais j allais pas creer un topic pour ca:
 
comment appel t on la loi/theorie (un truc ds le genre) qui dit que beaucoup de decouverte sont faites au hasard???
 
merci d avance

Amha ta question est mal formulee.  
 
"hasard" est un peu fort quand meme.

 
 
ds le sens ou ils ont trouve un truc k ils ne cherchaient pas  
(je crois ke c'est le cas pour pasteur par exp)

 
Ben Pasteur c'est l'inverse, il savait tres bien ce qu'il cherchait, il lui manquait les moyens de l'observer.
 
Je pense que tu fais plutot allusion a Fleming qui a trouve la penicilline en oubliant une culture sur sa paillasse, les champi ont commence a pousser et a synthetiser un compose anti-bacterien.  
 
Mais je vois pas trop.

yep c est ca et y en a bc plus ke l on crois.
et ce genre de decouvertes ont un nom

 
esclave-doctorant dans un labo de chimie dans le publique (fac).

Bon allez je pose ma question:
 
Il faut que je monte une séance de TP fictive au cours de laquelle je vais faire purifier des la BSA à des élèves de 1ère STL.
 
Le but de la séance est de faire observer le salting-in et out du sulfate d'ammonium.
Je comptais faire précipiter une solution de BSA à 10, 20, 30...100% de satuartion une tranche de 10% par binôme.
Le truc c'est que le TP ne fait que 4h et ils n'avancent pas aussi vite qu'un étudiant de Fac.
Par conséquent il faudrait doser les protéines précipitées sans les passer sur colonne pour désaler la solution, ou alors que ça soit rapide. (quelle colonne et quelle tampon etc.)
 
Le dosage serait un bradford, le problème c'est que ça marche en dessous de 30% de saturation, il existe un autre dosage qui fonctionne à 40% de saturation.
Mon problème c'est qu'on sera largement au delà de ses valeurs après centri pour les produits resuspendus (enfin je pense).
 
Donc: Comment faire un dosage de protéine facile à réaliser qui coûte pas la peau du cul et qui supporte une concentration de sel assez élevée?
Note: Le sulfate d'ammo ça absorbe dans l'IR.

 
Tu peux peut-être faire une simple lecture de DO à 280 nm, je crois pas que le sulfate d'ammo absorbe dans cette plage de longueur d'onde.  
Une autre possibilité consiste à tout simplement prédiluer les échantillons 5 fois dans l'eau avant de faire le Bradford. Au pire, tu pars de quantités supérieures de BSA.
 
Sinon, si l'objectif, c'est de montrer à des petits jeunes des méthodes de base pour purifier une protéine, puis la repérer, je te conseille d'utiliser la catalase plutôt que la BSA. Cette protéine est à peine plus chère, mais elle est très facile à localiser : tu prélèves 5 µl de chacune de tes fractions 10%, 20%,..., et tu en fais des gouttes sur du parafilm. Ensuite, tu rajoutes 5 µl d'eau oxygénée à chaque fraction. Dans les fractions contenant la catalase, tu vas voir la formation très rapide de bulle (correspondant à la dismutation de H2O2 en H20 et O2 par la catalase). Très simple à faire.
 
Evidemment, il faut trouver la concentration de SA pour faire précipiter la catalase.

 
Au fait, il est sympa comme prof Anton?

Bon les gars mon homesweethome est envahi de drosophiles. Quel est le grand coquin de bidouilleur d'enzymes à l'origine de cet acte méprisable ?
Qu'il se dénonce, ou je devrai tracer la phylogénie des marqueurs fluorescents apposés sur leur chromatine jusqu'à retrouver le n° de SIRET du labo qui a manufacturé ces saloperies de volatiles
 
 
(oooooh tiens une pomme pourrie dans la corbeille de fruits )

 
 
C'est-a-dire ?  

 
C'est pas moi
 
Moi je bosse sur les petits vers  

Petits vers de merde qui ne sont pas foutu d'avoir gardé un semblant d'homologie cohérent au niveau protéique avec les autres espèces !!!      

Regarde le film "Red Planet" (Planète Rouge in French) et tu comprendras :  
les nématodes viennent de l'espace
 
(bon dans le film ça ressemble plus à des cigales qu'à des vers mais quand même)

 

Pour ce qui etsde la catalase ça aurait pu être pas mal, mais pour bien comprendre le sulfate d'ammo je pense qu'il ets préférable qu'ils tracent les courbes de salting in/out pour bien voir que ça se redissout quand on met trop de sel.
Par conséquent il vaut mieux qu'ils aient une mesure d'absorbance proportionnelle à la concentration/quantité en protéine.
Merci pour les infos.

Y a un D.ieu pour les boyos : un Pholcus vient de débarquer de je ne sais où pour aterrir sur mon écran. Le chtit pépère a été expulsé en direction de la cuisine, il va pouvoir faire une orgie de drosos

T'es juif ?    

T'es antisémite ?
 
(ah merde t'es suisse...)
 
Tu veux un procès sur le dos ?
 
(moi non plus, donc je rajoute le '.')

Mais heu !!!!    

Pourquoi ? On a un procès maintenant si on prononce le nom de Dieu ?  

 
Rasthor est de-TT-ise  

Papier enorme dans Nature aujourd'hui:    
 
L'injection de miRNA et analyse transcriptionnelle globale (micro-array) montrent qu'un seul micro-ARN semble reguler l'expression d'une centaine de genes      
En gros tout ce qu'on sait sur les promoteurs et la chromatine, est a prendre avec des pincettes    
 
 
 
 
article ici
 
L'article est payant mais vous pouvez lire l'abstract. Si certains sont interesses par la totalite de l'article ==> MP  

 
Il a l'air intéressant ce petit papier    
Sinon, dans le Nature du jour, il y a un joli tir groupé avec 3 articles sur la mélanopsine, la protéine responsable de la photosensisibilité. Ca devait vraiment être chaud pour qu'il y ait trois papiers similaires dans le même numéro de Nature  

Y'a aussi une analyse en molecule unique du complexe ATP-synthase  

Comment ça en molécule unique?

 
Ben ils suivent le comportement d'une seule molecule, c'est tres en vogue en ce moment, c'est le mariage de la Biologie et de la Physique.
 
Ca permet de poser des questions comme: a quelle vitesse tourne le complexe ATP synthase, quelle est l'elasticite d'une molecule d'ADN, a quelle vitesse se replie une proteine lors de sa synthese etc etc

Ah oui je suis con.
Je croyais qu'ils suivaient qu'une molécule du complexe...
Ce qui est complètement con pour étudier un complexe.

Y a une dame qui a besoin de vous, elle aimerait savoir comment recoller des séquences d'ADN

C'est un boulot de medecin.  
 
Nous ici, on touche pas les patients

Enfin que s'il sont très très gentils alors.

Tout le monde es ten vacance?

Nan moi je suis au labo  

Ben moi je tape mon rapport.

Et bin moi j'extrais des bandes à coup de Qiaex®II

RT-PCR quanti aujourd'hui    
 
La manip' a 1000 euros  

Et moi je suis là.

Où est-ce que je peut acheter une solution d'hémoglobine?
Parce que j'en trouve en poudre, mais c'est de la méthémoglobine, ce qui ne me facilite pas la tache pour la spectro.

 
Sigma