Reprise du message précédent :

 
Vous parlez de quoi, la ?  

 
Le feuilleton de ce début d'année:
 
Soleil vert contre les vaccins diaboliques )
 
http://forum.hardware.fr/forum2.ph [...] 1#t4653115

 
 
Oki   j'y vais plus sur ce topik, Soleil Vert m'a vraiment saoule    
 
Bonne recherche soit dit en passant
 
J'attends sa reponse avec impatience  

ça c'ets de l'appareil de golgi...
Est-ce vraiment la même chose sur l'autre photo?

En C c'est aussi du golgi:

Et ça c'est le vrai Golgi:

EDIT:

P'tain apparamment demain gros papier dans Nature sur un nouvel oncogene, les chercheur l'ont appele...
 
 
 
 
Pokemon

des fois on se demande...

C'est pas possible  

 
Il y a quelques années, ils avaient baptisé une protéine "Sonic Hedgehog" aussi... Par contre, il n'y a pas encore de protéine "supermario" à ma connaissance.
 
C'est l'avenir de la recherche : tu finances ma recherche à hauteur de 200.000 euros par an et en échange, je nomme mon nouveau gène "Coca-Cola"  .

Les meilleurs sont, sans aucun doute, les geneticiens du vegetal avec des superman, kryptonite et chez la droso, pollux, castor etc  

Et les immunologistes:
Pelle et cactus...

Y'a de ces noms dans les protéines, c'est des fois hallucinant...

Remarque ca change de la nomenclature bien chiante chez cerevisiae  et  C. elegans style 3 lettres, pas plus, e tqui doivent decrire le phenotype etc (cdc, rad )  
 
c'est moins fun  

j'viens de tomber sur une molécule que je connaissais pas:
 
http://www.chemicalland21.com/arok [...] SINATE.htm
 
1er synonyme

Il fallait y penser.

 
Y a aussi le sarkozyl, un détergent de plus en plus utilisé en biochimie des protéines membranaires. Très efficace pour dissoudre les corps d'inclusions ( et non de réclusion)
 
Edit : d'ailleurs, c'est exactement la molécule du lien, je devrais aller dormir  

 
oh tiens je m'en rappelle de celui-là! (Shh) il était impliqué dans le développement embryonnaire je crois!
 
edit: je parlais du gène

 
C'est un peu tot    
 
C'est pas utilise dans les savons aussi ?  

 
Il me semble que c'est plutôt du SDS dans les savons (surtout dans les gels douches)

LEs savons sone des sels d'acides carboxyliques
et les détergents des sels d'acides sulfoniques si je ne m'abuse.

 
Les détergents ne correspondent pas à des groupes chimiques particuliers, mais plutôt à leurs propriétés physicochimiques : une moitié hydrophile (doit être courte et large) et une moitié hydrophobe (doit être longue et étroite). Par exemple, le SDS : une queue hydrophobe CH3-(CH2)11- et une tête sulfate hydrophile. l'octylglucoside : une queue CH3-(CH2)7- et une tête glucosidique hydrophile.

C'est plus de la structure en somme.

 
Les détergents, c'est quand même super utiles pour tous ceux qui travaillent avec des protéines membranaires, même s'ils sont allergiques à la structure  

Oui y a quoi...5% à 10% des protéines cristallisées qui sont membranaires
Sur les milliers qui le sont (cristallisées je veux dire).

 
 
-le SDS est utilisé en effet dans les shampoing
-hedgehog a été appelé ainsi d'apres l'animal, porc-epic, parce que sous certaines conditions (je sais plus lesquelles   ), ce morphogene donne cet effet. (je crois que ça a été decouvert chez la drosophile, chez les oiseaux il est a l'origine du developpement des ailes)

 
 
Hello    
 
Premiere intervention de grande qualite    
 
Ca s'ecrit Hedgehog    
 
L'homologue chez les mammiferes s'appelle sonic hedgehog (carrement comme le jeu ) il me semble qu'il a un role dans la polarite    

pardon, misprint  

CQFD

Allez, debout la-dedans !
 
 
 
 
 
 
 
 

salut a tous !!!
 
j'aurias besoin de vos lumières sur la faisabilité d'un éxpérience :
 
je voudrais transfecter un gene dans des cellules humaines ... sachant que la transfection selon le vecteur usité ne sera pas totale sur ma culture cellulaire , comment savoir quelle cellules ont bien recues le gene d'intéret ...
 
j'ai bien pensé coupler mon gene a la GFP ... ma protéine formée sera inactive ...c'est con !!!!
 
insertion d'une gene de résistance ???  
 
si une personne ayant eu le meme problème pouvais m'aider se serai sympa !!
thx

 
 
Typiquement on transfecte 2 plasmides dont l'un code effectivement pour un marqueur (la GFP sous un promoteur fort). Le taux de transfection varie selon le type cellulaire et le protocole. Quelles cellules veux-tu transfecter, et avec quel gene ?    
 
Note: il n'y a aucun moyen de le savoir de maniere ponctuelle, tu estimes le taux de transfection et tu regardes l'effet desirer, si ca match c'est bon.

 
 
merci pour ta réponse ..... mais transfecter 2 plasmides ??!!!
deja que pour un plasmide c'est pas la joie ..mais 2 .... rien ne me dit que les cellules ayant recues la GFP auront recues le plasmide contement mon gene d'interet ... et vis versa ...des cellules non marquées peuvent avoir recues le gene d'interet ( comment savoir ?)...
 
qu'en penses-tu ?
 
 

 
En fait, un plasmide est jamais tout seul, il est en réalité dans un amas de plusieurs dizaines de plasmides. Donc quand tu transfectes des cellules par plusieurs plasmides, soit elles en reçoivent aucun, soit elles en reçoivent plein de chaque sorte.  
 
J'ai vu des cas où on transfectait avec jusqu'à vingt plasmides à la fois (là, ça commence quand même à mooins bien marcher)
 
PAr contre, si tu as des soucis de tranfection, tu as peut-être intérêt à changer de protocole. Il en existe plein et d'un type cellulaire à un autre, il faut pas forcément utiliser le même. Tu utilises quelle méthode ?

 
 
+1 pour Svenn.
 
 
Ce que j'en pense: les cellules humaines, c'est nulle    
 
Plus serieusement, tu estimes ton taux de transfection avec un marqueur (disons 50%) et ensuite tu peux etre "a peu pres" que ce taux peut etre elargi a l'autre plasmide.  
 
Mais si tu nous expliquais plus precisemment ce que tu veux faire  

 
Tout a fait d'accord. Les cellules humaines, ça coûte cher, ça pousse pas, ça crêve dès qu'il fait chaud, froid ou alors que tu lui as demandé de surproduire une protéine. En plus, il faut s'en occuper tous les jours, même le week-end et les jours fériés.
 
Moralité :  

 
 
le truc que je veux faire :
1/
je veux éteindre un gene dans des cellules humaines
mon idée : ????
peut etre insérer un siRNA .... vecteur adénovirus ...pas facile à faire il faut avoir une bonne sequence homologue du RNAm cellulaire pour provoquer une hybridation .
 
si vous connaissez d'autre technique ..je suis preneur !!
 
2/
je voudrais surexprimer un  gene dans des celulles humaines  
 
3/ autres sujet ..je voudrais voir l'effet de l'inactivation/activation d'un protéine dans les memes celulles
 
je pensais coupler le gene de ma protéine sur un promoteur Heat shock  
 qu'en pensez vous ?  
 
 
les cellules humaines, ouais c'est nulle, mais pour se rapprocher d'un modèle in vivo  y' a pas mieux  .... donc c'est pas de ma faute  !!
 
merci pour vos lumières !!! je rame

RNAi ca marche tres bien, reste a voir ta lignee. Il existe des logiciels gratos pour elaborer tes bouts d'ARN. Quant a la meilleur methode, Svenn sera plus au courant que moi. En gros soit tu injecte directement tes ARN double-brin (c'est cher a synthetiser) soit tu fais une construction plasmidique qui coderont pour des ARN "hairping". Les plasmides existent deja, y a qu'a cloner un bout de ton gene dedans. Le maitre-mot est : essaye plusieurs conctructions differentes  
 
 
 

HSP c'est inductible, je suis pas sur que ca soit tres fort   Classiquement tu le mets sous un promoteur constitutif fort comme smv. Maintenant moi je te donne un conseil, ne mise pas tout sur UNE manip/methode mais essayes plusieurs strategies, paske tu nous exposes un probleme relativement courant de bio mol (il me semble) et y a tjs un declalge entre le possible (sur le papier) et le resultat (ton joli western blot)    
 

Si    Sur un organsime entier    (comme C.elegans   )

Je pense que Svenn pourra plus t'aider que moi  

 
Je connais pas bien tout ce qui est siRNA et malheureusement, les adéno font partie des familles virales que je connais le moins bien. Je préfère rien te dire plutôt que de dire une bêtise  

 
+1 pour RyKM, si ta protéine est pas trop toxique, tu trouveras difficilement mieux que le promoteur cmv. Par contre, si la protéine produite est toxique, il faut surtout pas utiliser le cmv, mais plutôt un promoteur inductible. Dans des cellules humaines, à mon avis, il y a facilement 50% de protéines toxiques quand elles sont surexprimées, dont en particulier la plupart des protéines membranaires.
 

 
J'imagine que le promoteur Heat Schock est activé en augmentant la température ? Dans ce cas, je ne pense pas que ce soit une bonne idée, tu auras du mal à savoir si les effets que tu observes sont dûs à ta protéine ou à la température (cinq ou dix degrés de différence, ça peut changer beaucoup de choses). Ca doit se trouver facilement des promoteurs inductibles en présence d'un composé à rajouter.

Mais nan il faut utiliser des cellules cancéreuse!