Reprise du message précédent :
Bon, j'ai toujours pas réussi à avoir quelque chose de correct. J'ai une autre question. Pensez vous que une culture post electroporation sans antibios (j'utilise peni/strepto) peut influencer?? Style les pc12 avec des trous dans la membrane n'aiment pas les antibios  (notemment la streptomycine).

Hephaestos > OK

 
Les antibiotiques n'ont aucune raison de faire du mal à des cellules de rats, donc je ne pense pas que le problème vienne de là. Tu utilises quoi comme approche pour savoir si la transfection a marché ? (par exemple, marquage GFP, recherche de la protéine synthétisée en WB, ...)

 
Je fais des lames + recherche de la protéine synthétisée en WB. Sachant que ma protéine est couplée flag. Pour les lames je fais un double marquage avec un DAPI. Dans quelques expériences j'ai eu de belles bandes (mais évidemment avec très peu de protéines récupérées). Ma protéine est cytosolique et fait 37 kDa.  
 
J'ai une nouvelle piste et je suis en train de fouiller du coté de l'extraction protéique.. De plus je fais une lipofection cet après midi... (j'ai convaincu mon patron que si il en avait acheté ce n'était pas pour la regarder... )
 

 
Dans ce cas, une possibilité, c'est que le problème vienne de la protéine plutôt que de la transfection elle-même. Est-ce que ta protéine pourrait par exemple être difficile à replier ? Est-ce que tu arrives à produire ta protéine de façon satisfaisante dans un autre système (pas forcément en tranfection)?  Si ta protéine est naturellement présente en très faible quantité dans une cellule, elle pourrait très bien s'aggréger ou se dégrader quand tu la produis de façon plus intense. Cela pourrait notamment être le cas si ta protéine est naturellement associée à un cofacteur (autre protéine ou petite molécule) qui pourrait jouer un rôle de cofacteur. Cela est également souvent le cas quand ces protéines ont des régions peu ou pas repliées. A la louche, je dirais un domaine d'au moins 15 résidus très riche en G,S,D,E,T,P  
 
Une autre possibilité, c'est que ta protéine soit toxique et qu'elle tue les cellules dans lesquelles elle est produite.

 
Je dirais plutot ca en fait, vu la tronche des cellules 24h et 40h après transfection.
Sinon, ma protéine est juste un "bout" de protéine qui n'est pas censée être associée à un cofacteur. Il n'y a pas d'endogène. Elle possède deux domaines coil-coil et je ne sais pas si c'est difficile à plier ou pas.

 
En général, les domaines coiled-coil, ça se replie assez bien, mais chaque protéine est un cas particulier.
 
Sinon, d'après ce que tu me dis, je pense aussi qu'il s'agit d'un problème de protéine toxique pour ta cellule et que la transfection se fait correctement. La meilleure chose à faire serait de placer le gène codant pour ta protéine sous le contrôle d'un promoteur inductible. Cela te permettrait de produire ta protéine au dernier moment et de limiter l'effet sur les cellules.

Les lentiviral vectors de chez D. Trono sont particulièrement pratique pour ça si jamais...
 
http://tronolab.com/lentivectors.php

 
  Clair que ca serait bien, limite faire une lignée... Mais je préfère garder ca en dernier recours vu qu'après on en aura plus besoin. Enfin bon je vais essayer de magouiller, je te tient au courant.    
 
Cardelitre--> c'est une pub ton post?

Meuh non... C'est un bon plan

Ah, enfin un sujet on-topic à propos duquel je puisse converser normalement :
 
Les équipes de recherche française sont autorisées à faire de la recherche.
 
joie.
 
Vous avez plus qu'à prendre le train en route et à montrer aux coréens que c'est pas 5 ans de retard qui vous font peur !
 
http://www.lemonde.fr/web/article/ [...] 756,0.html

C'est vrai que les coréens s'en donnent à coeur joie avec les cellules souches depuis quelques temps... Ils sont sacrément moins emmerdés avec les questions éthiques visiblement.

 
C'est koi un coréen?? skoi l'éthique??    
 
Plus sérieusement, eh be, c'est pas trop tôt!

S'clair. Faut pas se leurer, de toute façon quelqu'un aurait fini par le faire, et vu le potentiel du domaine, c'est con que ça soit eux d'abord...  

 
 
Y'a pas qu'eux, aux UK ça n'a jamais été interdit...

 
Etre autorisé à faire de la recherche sur les cellules souches, ça veut pas forcément dire que les équipes concernées auront les moyens de travailler. Wait and see  

Et maintenant en Suisse, on a voté pour...
Sont bien mes petits compatriotes.

Ah putain y'a un "early publication" dans Science sur les télomères et j'ai pas les codes    
 
Pourtant je suis au labo, je comprends pas

 
Tu peux donner les références, je vais voir si on peut l'avoir d'ici.

Celui là?
 

 
 
Ouais c'est celui-la, apparamment c'est de la bombe atomique  

Cool, on va reparler de l'immortalité
Enfin si c'est que la peau... nos cadavres conserveront un joli teint de pèche ad mortem aeternam, whééé.

Sur-expression de la télomérase in vivo et pas l'ombre d'une tumeur    
 
Je veux voir l'artcle !!

 
 
Putain ils vont faire fortune avec un un truc pareil!!!    
 
Bon,j'essaye demain au boulot.

Personne pour m'envoyer l'article en pdf ?  

cay ici le nouveau topic gsnalf ?

Absolument pas    
 
Ici, on est sérieux  

 
MP  

Merci Svenn    
 
J'ai jamais lu un article aussi court    
 
Jolies manip', mais y manque un paquet de contrôles    
 
Ils ont dû se faire taper sur les doigts par les referees, j'imagine que c'est pour cette raison que l'article est si court... on reste sur notre fin/faim  

Vous connaisez l'histoire du mec qui a ramené 25L de bières belges dans son sac à dos?
Et ben il a besoin d'un massage!  

                             Salut,
 
Suis à la recherche d'études sur l'organisation neuronale du nématode.
Si vous pouviez m'aider.
Merci

 
Lequel ?    
 
http://www.wormbase.org/
 
Le linéage cellulaire est décrit de manière exhaustive chez C.elegans, tu devrais pouvoir trouver quelques reviews ici: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi

 
Ah oui, ce que j'ai oublié de vous préciser, mais vous l'avez peut-être remarqué au cours de votre première recherche : le petit nom de la bestiole en question, qui est une espèce de nématode, c'est Caenorhabditis elegans.
 
Vous avez une revue relativement récente qui parle de la chose, disponible ici : http://arjournals.annualreviews.or [...] Code=neuro
 
Envoyez moi un PM si vous voulez l'article complet.

 
Tien, ça me fait penser que je voulais créer un topic depuis quelques temps à ce sujet, alors voila :
 
http://forum.hardware.fr/hardwaref [...] 7426-1.htm

Perso je fait mes recherches avec pubmed et google tout court.  
 
Sinon, pour mes transfections, je suis passé à la lipofectamine, ben ya pas photo, j'ai un rendement de récupération de ma protéine 10 fois supérieur aux electroporations...  
 
Problème résolu.

 
Lipofectamines c'est qu'on essaye en 1er généralement  

 
voui, je suis d'accord, mais le but était de réussir à electroporer correctement... Pour éviter d'utiliser la lipofectamine qui coute très cher. (Putain de labo fauché   )
 
Chez les cellules COS par exemple, on electropore très bien avec de meilleurs résultats que pour la lipofectamine. ca dépend des cellules, stou

Clonage d'un chien par une equipe coreenne, dans Nature aujourd'hui...  
 
http://www.nature.com/nature/journ [...] 6641a.html
 
 
edit: c'est une 1ere mondiale of course  

Super... on va avoir quelques millions de 'première mondiale' si ça continue... premier clonage d'un renard, premier clonage d'un loup, premier clonage d'un coyote, premier clonage d'un dingo, premier clonage d'un teckel, premier clonage d'un fox-terrier...

T'es vraiment lourd quand tu t'y mets    
 
Le chien restait une espece compliquee a cloner pour plusieurs raisons... reste plus qu'a esperer qu'on n'arrive jamais a percer le mystere du clonage de l'espece paulus benjanus    

Pas besoin, je sais me reproduire par mes propres moyens
(pas toi ? )