Reprise du message précédent :
Sans !!!!

Sans quoi ?
- Mon doigt
- (snif snif) Pouah

 
Surtout que c'est du transitoire, donc piqûre à répétition  
 
Par contre, je suis impressionné que 11 jours après l'i.v., le niveau du mRNA et de la prot soit encore aussi bas  
 
edit: je connais pas ces paramètres (ALT, AST et complément Bb) mais ça a l'air de quand même pas mal bouger chez les 2.5mg/kg surtout à 48h, cf suppl. table 1 et 2. Il a rien dit sur la réponse physiologique à cette dose?

Sanstième page.

Surtout suivant l'organe que tu vises, bof quoi...

C'est peut-ête à cause des dose quand même monumentale de siRNA injectées, 2.5 mg/kg c'est pas léger. Le temps que tout soit dégradé...  

Ouaip ça me paraît énorme aussi.
 
Faudrait voir ce que ça donne sur le long terme et avec des piqûres de rappel

Voire un système d'implant sous cut qui délivrerait des doses légères mais continues sur le long terme, je sais que ça marche avec certains types de molécules, mais je crois pas que ça ait déjà été tenté avec des siRNA...

Startup!

(putain je suis mal, j'ai vu ta signature et au lieu de lire "Penelope Cruz", je vois "Santa Cruz"   )

Départ! On se lance dans la galénique...
J'avais vu qu'il y vait une boîte suisse-romande qui s'était créée récemment et qui se faisait des couilles en or dans ce domaine...

T'as besoin de vacances...
Et Santa Cruz caÿ le mal...

 
En plus c'est vraiment une boîte de mayrde avec des anti-corps qui marchent une fois sur deux  

C'est pour faire plus sérieux l'échelle logarithmique, où ya une réalité biologique derrière (activité biologique logarithmique) ?
 
(C'est mon avis personnel, mais ça me frustre de ne pas pouvoir réaliser les vrais chiffres qu'il y a derrière à cause d'une échelle tordue)
 
/edit : ben mince, limite burned là, j'avais po vu la page.
 
Bordel, j'y étais  

Uniquement pour une question esthétique, je pense

Mouais, et ils appellent ça de la science... Bah. Franchement c'est dommage, on perd l'avantage d'avoir un rendu graphique des nombres.
 

L'esthétique avant tout
 

 
 
http://probes.invitrogen.com/servl [...] any=probes

 
On dirait un champignon atomique  

Ca c'est de la science    
 

C'est superbe, on dirait des photos de nébuleuses...
 

C'est fait avec quel matos ces images ?
 
C'est une illusion d'optique le rendu 3D ?

 
Nan c'est du confocal   Tu scannes chaque plan et tu reconstitues tout ça; t'as un objet en 3D que tu peux manipuler. Ensuite tu peux projeter le tout sur un seul plan. Y'a aussi un traitement qui abaisse le bruit de fond (la déconvolution)  

Ah wé, du confocal en scan, spa bête, je ne savais pas que ça existait. Et en version tomographe, c'est possible ? (on aurait alors une résolution homogène dans les trois dimensions, c'est myeux).

Ouais y'a plein de nouvelles approches qui émergent ces derniers temps, elles ont toutes la particularité de restituer l'objet en 3D et même 4D (cellules vivantes aytou   )
Etant pas trop physicien je ne saurais t'expliquer le fonctionnement    
Perso du moment qu'on voit des belles couleurs ça me suffit    

Le top c'est quand même ces images que j'avais postées il y a qq temps, que j'avais faites avec un microscope playskool dans ma cuisine:
 
 

 
 
 
Très jolies images du jour (article en libre accès en plus).
 
J'suis tombé dessus par hasard en browsant les archives du Journal of Cell Science.
 
Vues de l'intérieur du noyau d'ovocyte de Xénope par microscopie à balayage par émission de champ.
 

 
De la chromatine et un corps sphérique liés à un filament (on se croirait revenu au bon vieux temps de la morpho de base )
 

 
Immuno contre l'actine
 
et une dernière en pseudo-couleurs:
 

 
Filaments intranucléaires liés à un corps sphérique
 
       
 
Le papier: http://jcs.biologists.org/cgi/content/full/117/12/2481

(non Hephaestos, avant que tu ne me le demandes sur un ton moqueur, je n'ai pas la moindre idée de comment marche un microscope à balayage par émission de champ )

Ca y est, l'est sorti le papier, dans le Nature d'auj  

Salut tout le monde, je suis en vacances  colloque pour le moment, j'ai pas trop le temps de lire le topic. Je pose juste une balise "IWH 100" avant qu'il ne soit trop tard et je lis tout à mon retour  

 
enfoire  

 
Pareil. Un coup, j'ai un blot tout blanc, un coup j'ai un blot tout noir. Au moins, les anticorps maison, ça révèle que les protéines qu'ils sont censés reconnaitre    

Encore faut-il avoir les lapins à saigner à disposition, ce qui n'est pas le cas ded tout le monde...

Tu les saignes comment ? La nuit à la lueur d'une chandelle, au centre d'un pentacle ? Blot magie noire ou blanche ?

Salut les biologistes ,
 
Hmmm, j'ai une petite question en biologie du développement (Détermination du sexe, toussa).
 
Apparement, le gène SOX9 est impliqué dans la réversion de sexe. Mâle vers femelle
 
Mais - et comme tjs - rien n'est clair dans mon cours, et ma question est la suivante :
Est-ce la présence ou l'absence de SOX9 qui entraine cette réversion ?
 
Et peut-on dire que le gène SRY entraine aussi une reversion de sexe ?
S'il est absent, réversion du mâle vers la femelle.
 
Merci d'avance

L'absence. Ce sont deux gènes masculinisants.
 
Si tu bloques l'un ou l'autre, la gonadogénèse suit sa voie par défaut, c'est-à-dire féminisante (moyen mnémotechnique: défaut->femelle)
 
(Sry est en amont de SOX9, c'est-à-dire l'expression de SOX9 dépend de Sry. C'est important dans la mesure où SOX9 se trouve sur un autosome et donc est présent, génétiquement parlant, autant chez la femelle que chez le mâle. Ce qui est pas le cas de Sry évidemment)

Salut a tous,
je voulais avoir si vous pouviez me dire tout ce que vous connaissez sur les séquences IRES.
J'ai lu dans un article que des chercheurs avaient fabriqué un transgène avec un IRES-GFP.
Je sais que cela permet lors d'une intégration ciblé styme recombinaison homologue d'exprimer la GFP sous le controle du gène cible..
Avez vous plus d'info ?
 
Par avance merci.
 
Par contre si vous avez des questions en transgénèse classique ou additive (recombinaison homologue) je suis a votre disposition....

Super, merci pour les petites précisions, je ne savais pas tout ça

 
Bon je suis sûr que tu auras d'autres precisions par les posteurs canoniques du topics mais je pour autant que je sache:
Si ton but est d'exprimer la GFP sous le contrôle de ton gène préféré (pour savoir dans quelle type cellulaire et à quel moment il est exprimé) tu utilises une construction qui fusionne la séquence -supposée- promotrice de ton gène avec la sequence codante de la GFP.
Si tu veux connaitre la localisation intracellulaire de ton gène, dans ce cas tu doit fusionner ta proteine et la GFP (les deux sequences codantes en phase sur ton transgène) en esperant que la machinerie de transport ne soit pas perturbé par la blob fluo qui colle au cul de ta proteine.
Si par contre tu veux realiser un OGM super pour ta compagnie, par exemple en tranfectant des cerevisiae avec le gène de la proteine qui catalyse la transmutation du plomb en or, alors pour prouver à tes patrons avides que ton transgène est transcrit:    
       tu realises une construction avec séquence promotrice + sequence codante + IRES + Sequence codante GFP, et si par bonheur un ARN messager est produit, la sequence IRES (internal ribosome entry site)  assure que la cellule essaira de traduire la GFP, independamment de ta proteine certes, mais seulement si ce messager existe, ie si ton transgène est exprimé.  
enfin ça c'est sur le papier. Quelqu'un qui a essayé sur la paillasse pourrait te dire à quel point c'est foireux/casse-couille je suppose... épissage et toussa
 
en fait l'ARN fabriqué a partir de ton transgène est dit bi-cistronique  : recrutement  classique du ribosome en 5' pour la proteine d'interêt et recrument sur IRES pour la GFP qui est une vilaine rapporteuse
[url] http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez [...] t=Abstract [/url]
 
pour la petite histoire, les IRES ont été decouverte chez les virus, qui sont bien content de pouvoir detourner la machinerie de traduction cellulaire ces sales petits opportunistes (soit feignant, soit feignant)
il en existe aussi chez les eucaryotes (voir pubmed) mais c'est pas etonnant si on considère que les gros facheux finissent toujours par piquer les idées des feignasses. Je suppose que ce n'est pas trop au goût des bacteries qui polycistronisent a tout va ... a la regulation des operons, quelle merveille...
voila.
 
Tiens à propos de régulation : J'ai assisté à la conference d'un gars qui s'appelle ronald breaker et qui est presenté comme le "pape" des riboswitches. Il nous a expliqué gentiment que l'operon lactose de monod/jacob/lwoff c'est plutôt une exception. La plupart du temps c'est le messager qui grace a une une structure secondaire en 5' reconnait le metabolite et qui se down regule au niveau traductionnel. Pas mal non? bon je debarque hein mais j'aimerai bien qu'un strucuralistes (svenn?) me dise s'il pense que les ARN peuvent lier specifiquement un peu pres tout ou si ils sont limités ( par exemple par le PM du ligand ou quelquechose comme ça)
 
a++    
 

 
Que veux-tu savoir exactement ?
 
IRES= Internal Ribosome Entry Site
Dans pubmed, y'a 1276 articles qui en relatent    
Pour les fusions GFP, c'est un outil extremement repandu, il existe meme maintenant des YFP (yellow), RFP (red) CYF (Cyan) etc egalement des GFP qui s'activent sous l'action d'un laser (pour etudier le turn-over).
Concernant son expression, encore une fois, il existe des tonnes d'astuces differentes, selon ton vecteur, la lignee cellulaire etc.
Du plus simple au plus complique: juste cloner dans un plasmide avec expression transitoire en cellules HeLa (1-2 semianes de boulot), ou Knock-in stable en cellule ES puis generation de souris transgenique (2-3 ans   )

 
Euh, je suis pas sur d'avoir bien compris ta dernière phrase, on sentait que tu commencais a fatiguer à la fin du post    
 
Les ARN sont capables de lier certaines molécules, mais les ligands sont beaucoup moins variés que pour une protéine par exemple : une brin d'ARN est beaucoup moins souples qu'un polypeptide, les chaines latérales sont beaucoup moins variées d'un point de vue chimique que les résidus, donc ça limite beaucoup les possibilités. Disons qu'en dehors d'une autre acide nucléique ou d'une protéine reconnaissant l'ARN, ça doit être très limité, les ligands de l'ARN.  
Comme ligands non spécifiques, on trouve de nombreuses molécules avec de nombreuses charges +.

Reprenons le travail après cette dure semaine de travail dans des conditions difficiles - neige, altitude, tartiflette, Apremont. D'ailleurs, voici une vue de la salle de conférence, vous comprendrez mieux ce que nous avons enduré    
 

 
D'un autre coté, nous passions notre temps bien au chaud dans la salle de conférence, donc la neige, on ne l'a pas trop vue  

C'etait ou ???