Reprise du message précédent :

 
La plupart du temps, c'est parce que c'est un gène de ménage dont on suppose avec sans doute un peu trop de confiance qu'il est toujours présent à la même concentration dans les cellules. Ca permet donc de dire que tu as utilisé la même quantité de cellules dans tes WB et que les différences que tu observes sur les gènes d'intérêt ne sont pas simplement dues à une différence sur la quantité de matériel utilisé.

Pour être plus précis, n'est ce pas utilisé comme témoin de charge pour chacun des gels ayant migré ?

Dans l'exemple au dessus, au moins 6 gels on dû être chargés. Si on veut être rigoureux, à quoi ca sert de montrer l'actin d'une seule des membranes ?

Bon, encore que là ya des bandes d’intensité a peu près égale partout

Dans le cas présent, ce qui est important pour la reproductibilité des résultats, c'est la version de photoshop (ou gimp) employée.  

 
C'est surement des membranes re-blottees, donc tu montres l'actin qu'une fois.
 

protéine de référence   c'est tellement passé dans les moeurs que si tu ne mets pas ça tu te fais démonter. Ma master 2 présente un WB de protéine mb et un "collègue" fait son malin en la cuisinant 5 min pour lui faire cracher qu'ell n'avait pas mis de prot de réf. sourire en coin et tout genre "ma p'tite vous faite une erreur de L2, et votre encadrant est vraiment une bille"... sur le coup j'ai dû me réfréner pour pas lui mettre une beigne, mais quand est venu mon tour d'intervenir, je n'ai pas pu m'empêcher de lâcher que "quand on ne sait pas, on ne parle pas" ... pour info les prot membranaire sont une plaie à "sortir de la mb" et donc aucun intérêt de comparer avec l'expression d'une prot soluble, le mieux est de déposer le même qté de prot dans chaque puits.

je me suis faite reprendre une fois parce que j'avais une histone à la place de l'actine... qui avait la même taille que ma prot. Ca n'a pas posé de problème en fait mais c'est vrai que ça surprend les gens.  
 
J'ai un talk cet été à EuroEvoDevo  

Tu parles des GPI-anchored là ?
 
Sinon, ya les gels stain-free de chez Biorad qui permettent de contrôler le loading (mais pas le transfert )

GPCR, et autres... ma "prot de post doc" avait 12 domaines transmb  

Vous avez suivi l'affaire Santa Cuz sinon ?

 
Raconte ?

Maltraitance animale, amende de 3.5 millions de dollars, révocation de la licence pour l'utilisation d'animaux => game over.

Quelle tristesse pour nos paillasses... tous ces anticorps de qualité partis

edit : il y a quelques exceptions, mais leurs anticorps étaient globalement franchement merdiques.

 
J'ai acheté deux fois des anticorps chez eux, une fois je suis tombé sur un anti-rien et une autre fois sur un anti-tout, j'ai pas renouvelé l'expérience

yep, quand ta prot n'avait qu'un anticorps dispo chez santa cruz... fallait soit croiser les doigts, soit poser un cierge... soit changer de prot ou de stratégie    
Quand j'ai fait ma conf inaugurale dans mon labo d'accueil et abordé ce point, les MCf qui utilisaient leurs anticorps depuis 3 ans ont changé de couleur  

 
J'ai jamais compris comment cette boite pouvait survivre avec la reputation qu'ils se trimbalaient.
 
Je me souviens un labmeeting:
 
L'etudiant: - J'ai trouve cette prot par MS faudrait verifier l'interaction par western
 
Le PI: - Il existe un anticorps qu'on peut acheter ?
 
- Oui chez Santa Cruz
 
- Laisse tomber, perds pas ton temps  

Si on faisait un point carrière ? Vous avez réussi a vous stabiliser ? Chef de labo, ou simple staff ?

Ca fait bientôt sept ans que j'ai fini ma thèse, je suis toujours en postdoc, et mon contrat fini dans un an. Je pense que j'ai raté le coche pour passer au niveau supérieur. Deux erreurs critiques que j'ai commises je pense:

1) Ne pas publier dans les journaux de top niveau (Cell, Nature, Science). J'ai publie dans des bons, voir très bons, journaux, mais ça ne suffit pas par rapport a la concurrence. Surtout en bioinformatique, quand ils viennent avec leur x-eme genome publie dans Science ou les GWAS dans Nature Genetics. Avec le recul, j'aurais du faire le forcing aupres de mes superviseurs pour tenter de publier la-dedans (mais entre vouloir et pouvoir, il y a un monde aussi. ).

2) Ne pas avoir fait de demande de grants ou fellowship anglaises pendant mes postdocs (ou participer a des demandes). J'ai fait des demandes de bourse pour revenir en Suisse, mais elles ont été refusée a chaque fois.

 
Il est vieux ce post, d'ailleurs on le voit plus Svenn

Oui, j'ai cherche "Cruz" dans le topic. Déjà en 2006, Cardelitre se plaignait.

 
Il est toujours là mais cet idiot a perdu ses identifiants et il a du créer un nouveau compte

De même. Et leur réputation était loin d'être usurpée.

J'ai un master et je bosse pour l'industrie. L'académie ça a jamais été mon truc et j'ai eu la chance de pouvoir saisir de bonnes opportunités.
 
On m'a proposé de faire une thèse mais j'ai toujours refusé. En gros la suite de ton poste était mon argument.

 
 
Ah j'avais pas vu le post.
 
J'ai eu un post l'annee derniere en France ou je roule desormais en Porsche grace aux salaires totalement indecents de la recherche publique francaise.
 
Dans les faits je suis toujours post-doc mais avec mes propres grant ; donc prochaine etape possible, demarrer un groupe.
 
Mais bon, avec 2 petits loups a la maison, j'ai pas toujours autant de temps que ca

 
lol c'est toi ?

C'est de la merde les Ac SC de toute façon

Edit: Overburned j'avais pas lu la suite.

 
tu peux être plus explicite parce que là je ne te suis pas ...

Ah pareil !    
Moi aussi j'ai pu me payer la voiture des mes reves avec quelques fonds par-ci par-la, un peu de boursicotage et surtout quelques bonus dans la pharma:

 
Et si vous vous demandez pourquoi je l'ai prise en gris, c'est parce que c'est moins salissant !

 
Qu'est-ce que t'as pas compris ?
 
Les salaires en France sont pourris, c'est pas un scoop.
 
Je suis dans le meme labo dans lequel j'etais post-doc donc techniquement ca change pas grand chose.
J'ai du lourd sous le coude sur le point d'etre soumis donc sur un malentendu je vais probablement candidater pour monter un groupe independant.
 
Avec 2 enfants en bas age, je bosse rarement le week end et je rentre tot (18h30-19h) donc c'est chaud

'tain la poussée d'urticaire rien que d'y penser, même 10 ans après...  

 
Quelle bande de branquignoles      
Quand j'avais commencé mon 1er post-doc ma cheffe m'a dit quasi le 1er jour: "bon, pour la cytométrie en flux ou pour les ELISA, tu évites les anticorps de chez Santa Cruz."    
Et puis c'était un running gag lors des confs/congrès et autres: le but étant de démasquer les labos2pov   ou ceux qui aimaient bien jouer avec le feu.
 
Jamais testé directement leurs anticorps mais bon, pour moi maintenant c'est uniquement BD, eBioscience, Biolegends, R&D, Peprotech, abcam.  
 

 
Je suis en immuno/parasito donc un peu borderline par rapport au topic mais je tente quand même: thèse finie en 2012 en UK + 2 ans et demi de post-doc à Paris + en ce moment post-doc à Liverpool 1 an déjà fait et 1 an à faire + éventuellement un peu de rab' si mon chef aligne les biftons (ou si je me sors les doigts du cul pour rédiger des grants   )
Cela dit, j'aimerai bien tenter ma chance en 2017 pour les concours de MCU en France. Mon objectif est d'enchaîner les papiers cette année pour avoir + de chances. Actuellement j'ai 9 papiers au compteur (4 en 1er auteur), 2 papiers soumis (dont 1 en co-1st et dans un sous-Nature), 3 en draft bien avancé et 5 à l'état d'idée ou pour lequels y'a qu'un draft primaire.
 
Je serai + que ravi d'avoir votre point de vue, vos cursus persos et de faire un concours de mythes avec vous   (dans l'optique de voir ce qui m'attend pour la suite   ). D'ailleurs merci Rhastor pour ton feedback.

Et tu veux pas tenter les concours de CR ?  

C'est bien pire que pour les MCU apparemment.
Des collègues chercheurs de mon ancien labo à Paris siègent dans des commissions de sélection CNRS et INSERM: c'est chaud patate ! Trop de candidats, sélection drastique (genre sur le nb de papiers dans des journaux à IF > 5 ; sur le nombre d'années de post-doc etc etc). A la fin ils finissent avec 2-3 candidats à CV similaire et heureusement ça leur arrive de juger en fonction du statut vie privée de chacun (genre déjà marié des gosses > célib) ou sur l'âge (on garde les plus vieux car les plus jeunes retenteront l'an prochain et l'auront sûrement...   )

Si j’étais evalué la-dessus, je passerais haut la main.

 
C'est pas si vrai, l'oral y fait beaucoup.
Le CV permet d'être sélectionné pour l'oral, ensuite c'est le projet qui fait tout.
Il ne faut pas uniquement raisonner IF, nombre de papiers.
 
 
Bon l'année dernière dans les commissions CNRS qui m'intéressent, 135 candidats pour 5 postes... INSERM 2 et 3 postes...
Mais si tu vas à l'oral, le CV ne compte plus trop, voire l'inverse, si t'arrives avec un Nature ou Science t'es attendu au tournant.
 
Bon par contre faut préparer l'oral avec des gens qui "connaissent" les commissions sinon t'as très peu de chances de décoder tout seul le machin.
 
Mais avec le nombre de papiers que tu as, je vois pas pourquoi tu tenterais pas  

Il faut deja etre sélectionné !
Quand t'appliques a des jobs ou ils recoivent 50-250 candidatures, ils n'ont pas le temps de lire les dossiers. Dans la liste de publications, tu dois mettre en évidence tes cinq meilleures publications. Donc ca leur permet de vite faire un premier tri avec CNS / pas-CNS.

Ce fut mon problème. Quand tu es dans un autre pays, tu ne connais pas trop de monde qui connaissent les commissions de ton pays d'origine.

Les deux fois ou je suis allé a l'oral devant une vraie commission, j'ai maîtrisé la présentation, mais je suis ramassé a l'oral sur les questions.

Edit: CNS = Cell / Nature / Science

 
C'est vraiment chiant quand même, puisque selon ton domaine la gamme d'IF peut être totalement différente. En fish immunology, quand on tape dans des IF à 2-3 on est content ; en parasito on peut monter à 7-8, en mammalian immuno bien plus haut.
 

 
C'est sûr ça coûte pas grand chose de tenter et de voir si le CV passe le 1er tri. Mais j'aime l'enseignement et je trouve qu'en tant que MCU t'as moins de pressions par rapport aux CR (rapports d'activité, pression pour publier) et que ça a l'air plus facile d'évoluer (enchaîner les échelons MCU oklm et tenter d'être Prof un jour versus concours CR1 puis DR2, DR1). Mais je peux me tromper.
 
Dans un monde de bisounours j'espère choper un poste pour la rentrée 2017. Maintenant, pour être un peu plus réaliste, si je peux avoir une expérience d'oral devant une commission (MCU ou CR) bah je prends. Déjà que j'ai tenté un poste MCU l'an dernier mais je me suis fait refouler direct au 1er jet (j'avais pas encore de papier publié en post-doc).

En étant CR tu peux enseigner, les universités adorent ça    
 
CR1 y'a pas de concours, tu passes direct au bout de 4 ans.
 
MCU j'en vois plein qui déchantent après qq années, en cause bien sûr les taches administratives.
 
Alors sans papier de post doc c'est pas la peine de candidater à quoi que ce soit.
 
Et même post doc dans le meme labo de thèse, ça passe pas; il faut un papier dans un labo different de celui de ta thèse.

 
De l'expérience de mon labo de thèse, je plussoie, les contacts en commission sont très importants.
 
Moi j'ai fait thèse en France, j'attends toujours que mon deuxième papier sorte (je me bats pour que ça bouge) sinon, un premier auteur dans une revue spé à moyen  IF, un trends in genet en premier (revue) et deux papiers en auteur du milieu.  
9 mois de chômage puis postdoc depuis plus d'un an aux US, gros grant, 5 ans de salaire, je ne regrette pas d'avoir attendu (mais c'est toujours une question d'être au bon endroit au bon moment). J'ai une revue de sortie et je suis en train d'écrire un petit papier. Les manips avancent bien pour un truc plus gros.  
 
Pour la suite, j'avoue que je trouve la situation meilleure aux US, les gens font plus confiance même si la publimétrie compte aussi. C'est plus facile de trouver quelque chose, c'est aussi beaucoup plus facile de basculer dans le privé. Mon mec est postdoc aussi, bioinfo, et il a déjà eu des propositions du privé (mais il ne veut pas tout de suite). Il aimerait qu'on retourne en Europe plus tard, mais la situation de la France ne fait pas rêver. Pour les papiers ici, l'impression que j'ai (sans doute lié au fait qu'on a plus d'argent), c'est que les gens foncent plus pour tester, même des trucs simples, juste pour voir ce que ça donne. On n'hésite pas à écrire des papiers, même petits justes pour ouvrir les thématiques et des collab. L'état d'esprit (en tout cas autour de moi et mes collab), c'est on fonce.
 

 
       avec certains copinages, les règles sont faites pour être contournées... (j'ai vu deux cas comme ça, beaucoup avaient bien gueulé à l'époque).

Oh tu sais niveau combine, moi j'ai vu un collègue chopper un poste de CR1 sans papier de post doc.
Bon sa chef était dans la commission.
 
Mais le gars vit un enfer, il se fait pourrir par tous les postdoc de l'institut ...

 
Tu m'étonnes.  
On a eu le même cas, une nana MDC sans papier de post-doc, juste un petit papier de thèse, recrutée alors qu'elle avait dit des conneries en commission de recrutement. La raison : il fallait donner un poste de MDC à sa chef x et qu'elle était à seule à "s'entendre avec x". Sic. Autant dire que X n'a pas été calmée pour autant (et à continué à harceler des gens) et que la nana a pris assez chez de la part des autres gens. Au dernière nouvelles, ils l'utilisent comme tech. C'est finalement triste pour tout le monde.  
 
Heureusement, je pense que la majorité c'est mérité/ça se passe bien, mais c'est tellement rageant de voir encore ça quand le marché est si tendu.

T'es dans quel champ ? Tu n'as l'impression que ne pas avoir de PhD va te pénaliser pour la suite de ta carrière ?

Je pense que je pourrai revenir dans le labo dans lequel je suis en stage et faire un PhD après mon M2 (qui commence en septembre), mais mon but c'est l'industrie. J'hésite pas mal en ce moment.