Bonjour à tous, alors je lance un grand appel au secours pour résoudre mon problème de coefficient d'extinction molaire pour le DNS ( acide 3,5 dinitrosalicylique)
Le but de mon TP est de mesurer la quantité de sucre inverti le saccharose ( Glucose + fructose) sous l'action de l'invertase.
Je davais tout d'abord réaliser une droite d'étalonnage
A partir de sucre inverti à 3mM, je prépare quatre tubes avec dans l'ordre 0; 0.1; 0.2; 0.4; 0.8mL de sucre inverti à 3mM. Je compléte jusqu'à 1mL d'eau désionisée et rajoute 1mL de solution tampon pH 4,8. Puis je rajoute 2mL de réactif DNS, porte au bain marie 5min à 100°C. Puis je rajoute 6mL d'eau désionisée.
Mon volume totale est donc de 10mL dans chaque tube.
Aprés avoir mesurer l'absorbance à 530nm, je dois tracer la courbe: Absorbance = f( Quantité de sucre inverti)
Donc pour la qtité de sucre inverti je fais: 3.10-3 * 0.1.10-3 = 0,3.10-6 mol sucre inverti.
je trace ma droite étalon, j'obtiens une droite qui passe par zéro. je dois me servir de cette droite pour calculer le coefficient d'extinction molaire du DNS.
Mon graphe est alors A=f(qtité)
mon coefficient directeur(a) est donc a= A/n
je trouve 284166.7mol-1
D'aprés la loi de Beer-Lambert A= E*l*Cp
l=1cm
donc El= a*Vtotal
El= 2841667.7*10.10-3= 2841.67L.mol-1
l=1cm donc E= 2841.67 L.cm-1.mol-1
Mais beaucoup d'autres ont trouvés dans les 280-300L.cm-1.mol-1
J'ai donc probablement une erreur mais je ne sais pas laquelle, est-ce que parce que mon volume est de 10mL et non 1Litre.
Qui peut m'aider?? Au secours je ne comprends plus rien mais aprés avoir retourné les chiffres dans tous les sens!!! 
